Semua orang tahu laboratoriumnya banyak, jadi berapa banyak orang yang tahu tentang laboratorium PCR? Dan apa saja persyaratan dasar untuk merancang laboratorium PCR? Kemudian akan ada VOLAB Xiaobian untuk berdiskusi dengan semua orang~
1, tata letak laboratorium PCR
Laboratorium uji amplifikasi PCR pada prinsipnya dibagi menjadi empat area kerja terpisah: area penyimpanan dan penyiapan reagen, area penyiapan sampel, area penyiapan dan amplifikasi campuran reaksi amplifikasi, dan area analisis produk amplifikasi. Untuk menghindari-kontaminasi silang, memasuki setiap area kerja harus mengikuti satu arah secara ketat, yaitu hanya dari area penyimpanan dan persiapan reagen → area persiapan spesimen → area persiapan dan amplifikasi campuran reaksi amplifikasi → area analisis produk amplifikasi. Pemindahan reagen dan sampel antara setiap zona percobaan harus dilakukan melalui jendela transfer.
2. Perancangan Sistem Ventilasi AC Laboratorium dan Pengendalian Tekanan
Laboratorium PCR tidak memiliki persyaratan pemurnian yang ketat, namun untuk menghindari kemungkinan-kontaminasi silang antar berbagai area percobaan, disarankan untuk menggunakan sistem distribusi udara-aliran penuh. Pada saat yang sama, proporsi pengiriman dan pembuangan harus dikontrol secara ketat untuk memastikan kebutuhan tekanan di setiap area percobaan.
2.1, area persiapan spesimen
Operasi utama di bidang ini adalah pengawetan sampel, ekstraksi asam nukleat (RNA, DNA), penyimpanan dan penambahannya ke tabung reaksi amplifikasi, dan penentuan sintesis DNA. Persyaratan gradien tekanan di area ini adalah: tekanan positif relatif terhadap area yang berdekatan untuk menghindari kontaminasi aerosol dari area yang berdekatan ke area ini. Selain itu, karena kemungkinan kontaminasi yang disebabkan oleh aerosol-selama operasi pemuatan, berjalan-jalan di area yang tidak perlu harus dihindari.
2.2. Tempat penyimpanan dan persiapan reagen
Operasi utama di bidang percobaan ini adalah penyiapan reagen penyimpanan, pengeluaran reagen, dan penyiapan campuran reaksi utama. Reagen dan bahan yang digunakan untuk penyiapan sampel harus dikirim langsung ke area ini dan tidak boleh melewati area lain. Bahan baku reagen harus disimpan di area ini dan disiapkan di area tersebut menjadi tempat penyimpanan reagen yang diperlukan. Tidak ada persyaratan ketat untuk pengendalian tekanan udara.
2.3, area analisis produk amplifikasi
Operasi utama di bidang ini adalah penentuan fragmen yang diperkuat. Area ini merupakan sumber utama kontaminasi produk yang diperkuat. Oleh karena itu, persyaratan gradien tekanan untuk area ini adalah: Tekanan negatif relatif terhadap area yang berdekatan untuk menghindari difusi produk yang diperkuat dari area tersebut ke area lain.
2.4, persiapan campuran reaksi amplifikasi dan zona amplifikasi
Operasi utama di bidang ini adalah amplifikasi DNA. Selain itu, penambahan cetakan DNA yang telah disiapkan (dari area preparasi sampel) dan campuran reaksi utama (dari area penyimpanan dan preparasi reagen) untuk menyiapkan campuran reaksi, dll juga dapat dilakukan di area ini. Persyaratan gradien tekanan di area ini adalah: tekanan negatif relatif terhadap area yang berdekatan untuk menghindari kebocoran aerosol dari area tersebut. Untuk menghindari polusi yang disebabkan oleh aerosol, aktivitas berjalan kaki yang tidak perlu di area tersebut harus diminimalkan. Operasi individual seperti pengambilan sampel harus dilakukan di bangku yang bersih.
3.1. Pembagian wilayah kerja secara ketat
(1) Pengaturan setiap area percobaan masuk akal;
(2) Setiap area percobaan harus memiliki tanda yang jelas (seperti nomor rumah yang mencolok atau warna tanah yang berbeda, dll.) untuk menghindari kebingungan antara item peralatan dan reagen di area percobaan yang berbeda.
3.2, pengaturan sistem yang wajar
(1) Pengaturan sistem ventilasi AC-yang masuk akal, coba gunakan sistem pendingin udara-kirim-penuh;
(2) Kontrol tekanan aliran udara yang ketat memastikan persyaratan tekanan yang berbeda di area percobaan yang berbeda.
3.3, operasi standar
(1) Teknisi laboratorium inspeksi amplifikasi harus melakukan-pelatihan-kerja dan hanya dapat melakukan uji amplifikasi gen klinis setelah lulus pelatihan;
(2) Selama operasi eksperimental, operator harus mengenakan sarung tangan dan sering menggantinya. Selain itu, penggunaan tutup sekali pakai selama pengoperasian juga merupakan tindakan efektif untuk mencegah kontaminasi;
(3) Pekerjaan pembersihan tepat waktu dan benar. Setelah percobaan selesai, area tersebut harus segera dibersihkan. Selain cairan desinfektan konvensional untuk desinfeksi permukaan atau iradiasi dan desinfeksi lampu ultraviolet, beberapa peralatan eksperimen juga harus menjalani sterilisasi tekanan tinggi.
3.4, manajemen yang ketat
(1) Mengontrol secara ketat personel yang masuk dan keluar laboratorium. Orang yang tidak terkait dengan eksperimen tidak boleh masuk atau keluar laboratorium sesuka hati, dan jika perlu, mereka harus membuat jalur dan pintu independen ke dan dari seluruh area eksperimen.
(2) Minimalkan berjalan kaki yang tidak perlu di area percobaan untuk mengurangi kemungkinan-kontaminasi silang.
(3) Area analisis produk yang diperkuat adalah sumber kontaminasi terpenting dari produk yang diperkuat. Larutan limbah tidak boleh dibuang ke laboratorium. Itu harus direndam dalam larutan desinfektan dan kemudian dibuang di tempat yang jauh dari laboratorium. Tip bekas sekali pakai. Bahan-bahan tersebut juga harus didesinfeksi dan disterilkan dan kemudian diolah secara seragam, seperti pembakaran;
(4) Area analisis produk amplifikasi mungkin menggunakan mutasi gen dan zat beracun tertentu, dan perhatian khusus harus diberikan pada perlindungan keselamatan pelaku eksperimen.
3.5. Fasilitas laboratorium lengkap
Fasilitas penunjang laboratorium yang lengkap merupakan syarat yang diperlukan untuk menjamin kelancaran kerja percobaan. Peralatan dan instrumen yang sesuai harus dilengkapi sesuai dengan konten eksperimen yang berbeda di setiap laboratorium, seperti bangku ultra-bersih, sentrifugal, dan pengumpan sampel.